Manual de Instruções - Agar Citrato Simmons

Identificação

Produto: Agar Citrato Simmons
Revisão: 00
Data: Jan/2019

Descrição

Meio para diferenciação de Enterobacteriaceae com base na utilização do citrato, conforme ISO 10273.

Composição (g/L)

• Cloreto de sódio: 5,00
• Citrato de sódio: 2,00
• Di-hidrogenofosfato de amônio: 1,00
• Fosfato dipotássico: 1,00
• Sulfato de magnésio: 0,20
• Azul de bromotimol: 0,08
• Agar bacteriológico: 15,00
• pH final: 6,9 ± 0,2 a 25ºC

Preparo do Meio

1. Suspender 24,3 g do meio em 1 litro de água destilada.
2. Misturar bem e dissolver sob aquecimento e agitação frequente.
3. Ferver por 1 minuto até completa dissolução.
4. Dispensar em tubos de ensaio e esterilizar em autoclave a 121ºC por 15 minutos.
5. Deixar esfriar em posição inclinada para formação de inclinações com 1–1,5 cm de profundidade.
6. Alternativamente, o meio pode ser dispensado em placas de Petri.

Armazenamento

Meio em tubos: 2–8ºC. Em placas: 8–15ºC. Meio preparado: cor verde-azulado. Meio desidratado: homogêneo, de fluxo livre e coloração verde. Descartar se houver alterações físicas.

Usos

Utilizado para diferenciar bacilos entéricos Gram-negativos pela capacidade de utilizar citrato de sódio como fonte de carbono e sal de amônio como fonte de nitrogênio.

Recomendado para diferenciação de coliformes de água e amostras clínicas. Utilizado como alternativa ao caldo de citrato Koser nas reções IMVIC. O meio também é usado para distinguir entre cepas de Salmonella citrato positivas e negativas.

• Indicador de pH: Azul de bromotimol
• Fonte de carbono: Citrato de sódio
• Fonte de nitrogênio: Di-hidrogenofosfato de amônio

Instruções: Inocular a superfície da inclinação e perfurar a base. Incubar a 35 ± 2ºC por 24–48h. Organismos que utilizam o citrato apresentarão crescimento e coloração azul. Testes negativos mantêm coloração verde.

Escherichia coli, Shigella, Yersinia e Edwardsiella: Teste negativo
Serratia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Proteus, Providencia: Teste positivo
Salmonella enteritidis (positivo), Salmonella typhi/paratyphi A/pullorum/gallinarum (negativo)
Yersinia enterocolitica: Incubar a 30ºC por 24h. Resultado negativo (coloração permanece verde)

Se resultados insatisfatórios forem obtidos (ex: Providencia), prolongar a incubação por até 7 dias.

Teste Microbiológico

* Inocular e incubar a 30ºC por 24 horas.

Armazenamento

Manter o meio em pó fechado após aberto para evitar hidratação.

Referências

• Simmons. J. Inf. Dis. 39:209, 1926
• Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 11ª Ed., APHA, 1960
• Edwards & Ewing, Enterobacteriaceae, USPHS, 1972
• Torregrosa and Ortiz, Pediatrics 59:35, 1961
• ISO 10273: Detecção de Yersinia enterocolitica patogênica

Símbolos

• Marçação CE
• Diagnóstico in vitro
• Certificação ISO
• Proteger contra umidade
• Proteger contra luz
• Observar limites de temperatura