Kit de Extração De DNA Genômico 50 Preparações

Características do Kit de Extração De DNA Genômico 50 Preparações

P Kit de Extração De DNA Genômico 50 Preparações proporciona uma metodologia simples e rápida de extração e purificação de DNA a partir de amostras biológicas (sangue total, soro, plasma, bactérias e tecidos vegetais).

A metodologia utiliza Isocianato de Guanidina e ligação covalente do DNA em partículas de sílica.

Especificações Técnicas

Apresentação:

- Kit para 50 amostras

Armazenamento:

- Temperatura ambiente

Componentes:

- Tubos com tampão de lise e resina Brasílica (L1)
- 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L2)
- 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L3)
- 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L4)
- 4 Tubos contendo o tampão de eluição (E1).

Protocolo básico:

- Homogeneizar o tubo contendo o tampão L1 (vôrtex por 10 s)
- Adicionar 100 mL de amostra no tubo com o tampão L1 (vôrtex por 10 s)
- Deixar o tubo em temperatura ambiente por 10 min agitando periodicamente a cada minuto.
- Agitar novamente no vôrtex durante 10 s
- Centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Descartar o sobrenadante (preferentemente por sucção, sem remover o precipitado)
- Lavar o precipitado adicionando 900 mL do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens, e novamente centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado
- Lavar novamente o precipitado adicionando 900 mL do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado
- Lavar o precipitado adicionando 900 mL do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado
- Lavar novamente o precipitado adicionando 900 mL do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Lavar o precipitado adicionando 900 mL do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s
- Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado
- Lavar novamente o precipitado adicionando 900 mL do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s Deixar secar o pellet a 56°C por 10 min com a tampa do tubo aberta (estufa ou termobloco)
- Adicionar 100 mL do tampão de eluição (E1) ao precipitado
- Com leves movimentos descolar o precipitado do fundo do tubo e deixar por mais 10 min a 56°C, desta vez com a tampa do tubo fechada
- Centrifugar por 10 min a 12.000 g
- Retirar o sobrenadante e transferir para novo tubo, pois aqui estarão os ácidos nucléicos extraídos
- Utilizar o material obtido em procedimentos de biologia molecular, como amplificação por PCR, Verificar a presença dos ácidos nucléicos através de eletroforese em géis de agarose corados com brometo de etídeo ou Blue Green Loading Dye (LGCBio), analisando sob luz ultravioleta ou quantificar em espectrofotômetro
- Para eliminar algum resto de resina nesta etapa, centrifugar novamente a 12.000 g durante 30 s.