SYBR Green qPCR Master Mix Low Rox 100 Reações

Característicass do SYBR Green qPCR Master Mix Low Rox 100 Reações

SYBR Green qPCR Master Mix LOW ROX é recomendado para ensaios quantitativos de PCR (qPCR).

Esta mix é composta do fluoróforo SybrGreen e a enzima recombinante HotStart Taq DNA Polymerase.
 

Especificações Técnicas

- Taq-Hot Start - DNA polimerase, trata-se da versão quimicamente modificada da enzima Taq DNA Polimerase Hot-Start, que evita amplificações inespecíficas durante as etapas da amplificação.
- Esta enzima requer uma etapa prévia de ativação de 95ºC durante 03 minutos.
- Esta mix é compatível com a maioria dos equipamentos para qPCR, inclusive os que não requerem o fluoróforo de referência ROX. A saber; Roche LightCycler 480, Qiagen Rotor-Gene Q / 3000 / 6000, Eppendorf Mastercycler ep realplex / realplex2 s, Illumina Eco qPCR, Bio-Rad CFX96 / CFX384, BioRad iCycler iQ / MyiQ / iQ5 and Thermo Scientific PikoReal Real-Time PCR, Bioer, Applied Biosystems 7500 / 7500 Fast / ViiA 7 / QuantStudio 12K Flex and Stratagene Mx3000P / Mx3005P / Mx4000. Componentes:
- Cada produto contem reagentes suficientes para reações de volume final 25 µL por reação. Cód. N°. 13-10505-01 100 reactions 1,25 mL 2X Sybr Green qPCR Master Mix LOW ROX D.A. 50 µL Hot Start Taq DNA Polymerase D.A.

Apresentação:

- 100 reações x 25uL

Armazenamento:

- –20°C.
- Estável por 10 dias em temperatura ambiente

Protocolo:

- Este protocolo indica as concentrações sugeridas para um volume final de 25 µL. Contudo, estes volumes podem ser modificados, de acordo com os ensaios de cada pesquisador.
- 1. Descongelar os componentes, em temperatura ambiente. Quando descongelados, preparar a mix de reação contendo; 2X Sybr Green Master Mix Low rox e os primers para amplificação da região alvo. Misturar no vôrtex e após centrifugar rapidamente para coletar todo o volume da reação no fundo do tubo. Para manter os componentes viáveis permanecer com os tubos no gelo.
- 2. Preparar a mix de reação como a seguir: Componente Volume Conc. Final 2X SybrGreen qPCR Master Mix or Master Mix LOW ROX 12.5 µL 1X Primer Forward (10 µM) 0.5 µL 0.2 µM (0.1 – 0.5 µM) Primer Reverse (10 µM) 0.5 µL 0.2 µM (0.1 – 0.5 µM) Hot Start Taq DNA Polymerase 0.5 µL DNA Template < 11 µL Nuclease-free water q.s.p. 25 µL Parâmetros de amplificação recomentdados: 2-Protocolo step cycling Stage Step Temperatura Tempo Hold Desnaturação inicial 95oC 2 min 40 cycles Desnaturação 95oC 15 sec Anelamento e extensão 60oC (data collection) 60 sec* Curva de Melting (dissociação) Proceder de acordo com cada equipamento * O tempo de extensão é dependente do tamanho do amplicon. Alguns primers podem precisar de uma etapa adicional de ciclagem para um melhor desempenho.
- 3 Protocolo step cycling Stage Step Temperatura Tempo Hold desnaturação Inicial 95oC 2 min 40 cycles Desnaturação 95oC 15 sec Anelamento 50oC – 60oC 15 sec Extensão 68oC – 72oC (data collection) 45 sec Curva de Melting (dissociação) Proceder de acordo com cada equipamento Ensaios de Controle da Qualidade Este kit é testado funcionalmente em ensaios de qPCR utilizando equipamentos Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System e Line Gene 9600 Bioer, seguindo os procedimentos descritos nesta ficha (protocolo de ciclagem 2-passos) para a detecção do gene de RNase P a partir de 20 ng de DNA genómico humano como template.
O gene de RNase P humana é um gene de cópia única que codifica a fracção de RNA para a enzima RNase P. A análise de ensaio de qPCR em tempo real deve demonstrar a detecção do gene de RNase P humano com um CT (limiar de ciclo) <30.